硅膠基質(zhì)液相色譜柱由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成,其中硅膠基質(zhì)液相色譜柱的正確安裝和使用,是液相色譜工作的關(guān)鍵。
硅膠基質(zhì)液相色譜柱在使用前,進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。
但要留意:柱性能可能由于所使用的樣品、活動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行,只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。
硅膠基質(zhì)液相色譜柱是樣品組分在柱填料與活動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求活動相具備以下的特點:
a、活動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保存在柱中)。
b、活動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學反應(特殊情況除外)。
c、活動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用進步溫度的方法降低活動相的黏度)。
d、活動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、活動相沸點不要太低,否則輕易產(chǎn)生氣泡,導致實驗無法進行。
f、在活動相配制好后,一定要進行脫氣。除往溶解在活動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止活動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。