中藥材的種類多成分復(fù)雜，而農(nóng)藥殘留分析屬于痕量分析，極易被中藥成分所干擾。因此2020版中國藥典第五法中, 提供了直接提取法,快速處理法和3種固相萃取法對(duì)基質(zhì)樣品進(jìn)行凈化, 并要求做空白基質(zhì)加標(biāo)曲線、 來減輕基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

      安譜實(shí)驗(yàn)做了大量實(shí)驗(yàn)摸索, 在中藥禁用農(nóng)藥檢測(cè)上積累了豐富的經(jīng)驗(yàn), 在此以一味藥材--金銀花中的農(nóng)藥殘留檢測(cè)為例, 講解下具體工作中如何進(jìn)行條件選取:

推薦的凈化方法和標(biāo)準(zhǔn)品搭配

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

一、基質(zhì)：金銀花

二、基質(zhì)樣品的前處理

1.快速樣品處理法（QuEChERS）法

產(chǎn)品特色：

★ 超潔凈填料，嚴(yán)控本底

★ 多管漩渦混合器，一次性可以處理50個(gè)樣品，可以提高數(shù)據(jù)的平行性

2.固相萃取凈化方式一：分散性固相萃取法（dSPE）

產(chǎn)品特色：

★ 超潔凈填料，嚴(yán)控本底

3.固相萃取凈化方式二：HLB SPE固相萃取法

產(chǎn)品特色：

★ 填料自產(chǎn)，嚴(yán)格質(zhì)控，易把控；

★ 極性、非極性化合物都有較高回收率；

★ 極duan耐酸堿下也有很好的回收率；

★ 特別適用于復(fù)雜基質(zhì)，流速快，過柱時(shí)間短。

4.固相萃取凈化方式三：石墨化碳氨基復(fù)合固相萃取法

產(chǎn)品特色：

★ 填料自產(chǎn)，嚴(yán)格質(zhì)控，易把控；

★ 農(nóng)藥多殘留檢測(cè)jia選擇。

三、分析條件

1.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

色譜柱：GAEQ-501222   CD-50氣相毛細(xì)管色譜柱 30m*0.25mm*0.25um

進(jìn)樣口溫度：250℃

分流模式：不分流進(jìn)樣

控制模式：恒壓，柱前壓力為146kPa

升溫程序：初始溫度60℃，保持1分鐘，以每分鐘10℃的速率升溫至160℃，再以每分鐘2℃ 的速率升溫至230℃，后以每分鐘15℃的速率升溫至300℃，保持6分鐘。

檢測(cè)器：三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀

離子源：電子轟擊源（EI）

離子源溫度：250℃

傳輸接口溫度：250℃

質(zhì)譜監(jiān)測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）

2.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

色譜柱：LAEQ-2110I1 CNWShell C18 液相核殼色譜柱 2.1 × 100mm，2.6um

流動(dòng)相：A相 0.1％甲酸溶液（含5mmol/L甲酸銨）  

              B相 乙腈- 0.1％ 甲酸溶液（含5mmol/L甲酸銨）（95:5）   

流速：0.3mL/min

柱溫：40℃

離子化模式：ESI，正離子模式分析

監(jiān)測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.金銀花基質(zhì)基質(zhì)樣品方法篩查譜圖信息

2.金銀花樣品方法篩選實(shí)驗(yàn)回收率數(shù)據(jù)

經(jīng)驗(yàn)分享

1.根據(jù)GC-MS/MS和LC-MS/MS的譜圖分析，不同前處理方法的凈化效果各有不同，總體來看，固相萃取法的凈化效果要相對(duì)好于快速Q(mào)uEChERS方法。不同基質(zhì)的凈化情況可能不盡相同。

2.根據(jù)回收率數(shù)據(jù)分析，GC-MS/MS和LC-MS/MS兩種儀器上，重復(fù)的目標(biāo)物只要有一種儀器滿足要求即可；金銀花樣品GC-MS/MS，方式一和方式二回收率基本滿足要求，均在60%-120%之間；LC-MS/MS儀器，快速Q(mào)uEChERS方法基本滿足要求，回收率較差的殺chong脒和水胺硫磷可使用GC-MS/MS數(shù)據(jù)，HLB方法也基本滿足藥典要求。

3.對(duì)兩種儀器回收率的數(shù)據(jù)以及操作的方便性進(jìn)行綜合考慮，金銀花樣品的you前處理方法是方式二（HLB小柱）凈化。一種凈化方法，一個(gè)樣品，可同時(shí)滿足GC-MS/MS和LC-MS/MS兩種儀器的檢測(cè)需求，且55種目標(biāo)物均可滿足60%-120%的要求。

4.不同的中藥材基質(zhì)效應(yīng)并不相同，不同的基質(zhì)可能選擇不同的前處理方法，一種基質(zhì)也可能需要選擇兩種不同的方法綜合進(jìn)行分析以滿足55種物質(zhì)的回收率。具體哪種基質(zhì)凈化方法更適合特定的藥材，需要進(jìn)行空白基質(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)來摸索。推薦優(yōu)先選擇HLB方法和QuEChERS方法進(jìn)行初步篩選。

安譜實(shí)驗(yàn)

2020版中國藥典禁用農(nóng)藥檢測(cè)方法包

01標(biāo)準(zhǔn)品

02超低本底的質(zhì)譜級(jí)試劑

03基質(zhì)凈化產(chǎn)品

04色譜柱

05計(jì)量器具

06*儀器